Свято-Успенская церковь тоже находится в крепости. Вся ее история связана с Успенским монастырем, построенным князем Валахии воеводой Константином Бранковяну. Церковь в монастыре была основана в 1643 году (грамота Константинопольского патриарха Парфения I).
В середине 17 в. монастыри, а соответственно и обе церкви, подчинялись Константинопольскому патриарху. В 1771 г. монастырь получает самостоятельность. Но уже в 1774 году крепость Измаил опять возвращается Турции. А 11 декабря 1790 года в монастыре произошла битва между татарами под предводительством потомка Чингисхана Максуд-Гирея и суворовскими войсками. Больше тысячи татар скрылись за стенами монастыря, но русские богатыри выломали ворота и захватили татар. И хотя во время сражения пострадала и Успенская церковь, 12 декабря в ней был отслужен благодарственный молебен. 29 декабря 1791 года был подписан Ясский мирный договор, и Бессарабия опять возвращается Турции, до 14 сентября 1809 года, когда русские войска вошли в Измаил.
Новая каменная Успенская церковь была построена и освящена в 1841 году. В конце 19 в. монастырь и церковь стали подчиняться Русскому Православному Синоду. Тогда же были построены и кельи из камня, которые сохранились до наших дней.
Румынское правительство в 1856 году закрыло оба монастыря, но после присоединения Бессарабии к России в 1878 году они были восстановлены и объединены в один Крепостной монастырь.
В 1946 году монастырь закрыли, около церкви со стороны Дуная были возведены пограничные ограждения. Церковь разрушалась временем и людьми.
В 90-е гг. началось восстановление памятников истории и архитектуры в крепости, создана дирекция парка-музея «Крепость». А 25 апреля 1995 года Одесский областной Совет Народных Депутатов принял решение «О передаче Свято-Николаевской и Свято-Успенской церквей соответствующим парафиям Православной церкви» , и они были переданы Украинской православной церкви Московского патриархата.
25 сентября 2002 года, по благословлению Высокопреосвященнейшего Агафангела, митрополита Одесского и Измаильского, приходы Свято-Николаевской и Свято-Успенской церквей были преобразованы в Свято-Николаевский мужской монастырь. В непригодную для жизни обитель пришли отец Алипий и еще трое человек. 21 марта 2004 года Его Высокопреосвященство Высокопреосвященнейший Агафангел, митрополит Одесский и Измаильский совершил всенощное бдение в Свято-Николаевском храме с постригом в монашество троих послушников и возведением в сан архимандрита наместника обители игумена Алипия (Цушко) и вручением ему жезла наместника.
На сегодняшний день церковь восстановлена и регулярно принимает прихожан.
Адрес: ул. Матросская, 23
